Effects of Kv1.5 on proliferation and apoptosis of rat PASMCs under hypoxia+hypercapnia condition and relationship with MAPK pathway

AIM：To investigate the effects of voltage-dependent K＋ channel 1.5 (Kv1.5) on the proliferation and apoptosis of rat pulmonary artery smooth muscle cells (PASMCs) under hypoxia+hypercapnia condition and the relationship with mitogen-activated protein kinase(MAPK) signal pathway. METHODS：The PASMCs isolated from the male SD rat were cultured under hypoxia+hypercapnia condition, and randomly divided into normal group (N group), hypoxia+hypercapnia group (HH group), hypoxia+hypercapnia+DMSO incubation group (HD group), hypoxia+hypercapnia+U0126 (an extracellular signal-regulated kinase 1/2 inhibitor) incubation group (HU group), hypoxia+hypercapnia+SB203580 (a p38 mitogen-activated protein kinase inhibitor) incubation group (HS group), and hypoxia+hypercapnia+anisomycin (an agonist of MAPK) incubation group (HA group). Cell Counting Kit-8 was used to detect the cell viability. The protein expression of Kv1.5, PCNA and Bax was detected by Western blotting. RESULTS：Compared with N group, the cell viability and PCNA protein expression in HH group and HD group were significantly raised (P<001), but Kv1.5 and Bax proteins were significantly decreased (P<0.01). No difference between HH group and HD group was observed (P>005). Compared with HD group, the cell viability and PCNA protein expression in HU group, HS group and HA group were decreased (P<0.05 or P<0.01), but Kv1.5 protein and Bax protein were raised (P<0.01), with the most significant changes in HA group. ^{CONCLUSION：}The regulation of Kv1.5 to the proliferation and apoptosis of PASMCs under hypoxia+hypercapnia condition might have a relationship with the activation of MAPK signal pathway.     

人参皂苷促进小鼠成骨细胞增殖的作用及机制

目的 观察人参皂苷（Ginsenoside,GSS）对小鼠成骨细胞增殖活性的影响,并探讨其作用机制。方法 采用MC3T3-E1小鼠成骨细胞系, 加入不同浓度的GSS （3.125~50 μg/mL） 培养后,MTT法检测GSS对成骨细胞增殖的影响,荧光定量RT-PCR法检测不同浓度各组细胞内p21和p27 mRNA的表达水平,并采用Western-blot检测细胞周期相关蛋白表达。结果 与空白对照组相比,3.125~50 μg/mL的GSS在24、48 h时均能够显著促进成骨细胞的增殖(P<0.01或0.05),其作用具有时间依赖性和浓度依赖性。50、25 μg/mL的GSS能够显著抑制p21和p27的mRNA表达(P<0.01),而12.5 μg/mL的GSS对其表达无影响。50、25 μg/mL的GSS抑制了细胞周期抑制蛋白p21及p27表达水平并上调Cyclin D1表达(P<0.01或0.05)。结论 GSS能够通过上调Cyclin D1表达,抑制p21和p27表达,进而促进小鼠成骨细胞增殖.     

microRNA-146a通过靶向MAPK4和Myosin Va基因调控羊驼黑色素细胞增殖、迁移

旨在研究microRNA-146a(miR-146a)对羊驼黑色素细胞增殖和迁移的调控及其分子机制。本研究使用双荧光素酶试验验证MAPK4和Myosin Va是miR-146a的靶基因;利用荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹试验检测在羊驼黑色素细胞中过表达miR-146a对相关下游基因表达的影响;利用CCK8和Transwell检测miR-146a过表达对羊驼黑色素细胞增殖和迁移的影响。结果显示,与对照组相比,将miR-146a和MAPK4或Myosin Va共转染293T细胞,双荧光素酶活性分别极显著下降36%和30%(P<0.001);MAPK4和Myosin Va基因转录水平分别极显著下调67%和47%(P<0.001,P<0.01);蛋白质水平的表达量分别显著或极显著下调38%和69%(P<0.05,P<0.01);增殖和迁移相关的基因CREB、MITF、MLPH和Rab27a在转录水平和蛋白水平的表达均极显著下调(P<0.01,P<0.001);CCK8和Transwell结果显示,过表达miR-146a使羊驼黑色素细胞的增殖和迁移能力极显著下调(P<0.01)。综上所述,miR-146a通过靶向调控MAPK4和Myosin Va,使增殖和迁移相关的基因MEK1、CREB、MITF、MLPH和Rab27a的表达下调,从而对羊驼黑色素细胞的增殖和迁移起抑制作用。     

过表达MyBPC1对牛骨骼肌卫星细胞增殖分化的影响

旨在探究肌球蛋白结合蛋白C1（myosin binding protein C1,MyBPC1）对牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的影响,为进一步研究MyBPC1在细胞分化和肌肉发育过程中的调控作用提供依据。本研究利用西门塔尔胎牛原代牛骨骼肌卫星细胞体外诱导成肌分化模型模拟牛骨骼肌的生长发育过程。采用qRT-PCR和Western blot检测MyBPC1的细胞时序表达谱。试验分为两组。在RNA水平每组4个重复,每个重复20 μL;在蛋白水平每组3个重复,每个重复15 μg。采用qRT-PCR和Western blot检测牛骨骼肌卫星细胞转染MyBPC1的过表达效果,并进一步检测细胞增殖期标志因子Pax7、Ki67以及细胞分化期标志因子MyHC、MyOG的表达变化情况,观察牛骨骼肌卫星细胞肌管形成状态。结果,MyBPC1在牛骨骼肌卫星细胞分化前后表达水平存在极显著差异,牛骨骼肌卫星细胞诱导分化后MyBPC1的mRNA和蛋白表达量均极显著高于增殖期（P<0.01）。过表达MyBPC1后,细胞分化形成的肌管数量明显多于对照组,增殖标志因子Pax7的mRNA水平和蛋白表达水平无显著差异,分化标志因子MyHC的mRNA水平和蛋白表达水平极显著高于对照组（P<0.01）。过表达MyBPC1可以促进牛骨骼肌卫星细胞体外成肌分化,为进一步开展MyBPC1对牛骨骼肌卫星细胞的调控机制奠定基础。     

高铜对大鼠肾细胞炎性因子和细胞增殖的影响

旨在探讨铜中毒对大鼠肾组织炎性因子的表达和细胞增殖功能的影响。本研究选用32只20日龄健康大鼠随机分为4组,每组8只,其中,对照组日粮的铜（Cu）浓度为15 mg·kg^-1;高铜Ⅰ组日粮Cu浓度为30 mg·kg^-1;高铜Ⅱ组日粮Cu浓度为60 mg·kg^-1;高铜Ⅲ组日粮Cu浓度为120 mg· kg^-1。连续饲喂6个月,检测肾组织Ki-67、PCNA、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-18、NF-κB、TNF-α的mRNA及其蛋白的表达。随着日粮中铜含量增高,肾组织中Ki-67、PCNA mRNA及其蛋白表达量显著降低（P<0.05）。炎性因子IL-1β、IL-2、IL-6、IL-18、NF-κB、TNF-α mRNA的表达水平显著升高（P<0.05）,IL-1β蛋白的表达水平呈剂量依赖性上升,IL-6和IL-18蛋白表达水平先上升,后下降。结果表明,日粮铜含量高于30 mg·kg^-1时,将不同程度地抑制大鼠肾组织的细胞增殖,促进炎性因子的表达,造成炎性损伤。     

连翘水提液体外对禽流感病毒增殖及炎症因子表达的抑制效应

旨在评估连翘体外抗H5N1和H9N2禽流感病毒（avian influenza viruses,AIVs）增殖及其介导炎症的效果,本试验制备了连翘水提液,首先采用CCK-8法测定了连翘水提液对DF-1细胞的安全浓度,并通过3种处理方法（药液预处理病毒后感染细胞、先感染病毒后给药、先给药后感染病毒）来筛选连翘水提液的最佳给药方式;在最佳给药方式下,使用TCID₅₀法检测禽流感病毒H5N1和H9N2的增殖情况,并采用qRT-PCR检测了炎症相关趋化因子和细胞因子的表达变化。结果显示,连翘水提液对DF-1细胞的最高安全浓度为4 mg·mL^-1;先感染病毒后给药是最佳的给药方式;在最佳给药方式下,连翘水提液能显著降低H5N1和H9N2 AIVs在各个时间点的病毒滴度,并呈剂量依赖性关系;与对照组相比,H5N1 AIV给药组中CX3CL1、IL8L1、CCL5、SCYA4、IL1β、IL-6和TNF-α的表达显著降低,H9N2 AIV给药组中CX3CL1、IL8L1、CCL5、IFN-β、IL-6和TNF-α的表达也有类似的下降趋势。这表明连翘能够抑制H5N1和H9N2 AIVs在DF-1细胞中的增殖,降低炎症相关细胞因子的表达,有良好的抗炎和抗病毒活性。     

大豆营元对HEC-1B细胞增殖及雌激素受体 报告基因表达的影响

〔摘要〕目的探讨大豆葺元对子宫内膜癌细胞增殖的影响及其对雌激素受体报告基因表达的影响、方法体 外培养子宫内膜癌细胞子宫内膜癌雌、孕激素受体阴性细胞系(HEC 1B),采用四甲基偶氮哩盐法(M1"P)检测不同 浓度大豆葺元对子宫内膜癌细胞增殖的影响,同时检测大豆葺元对雌激素应答原件(ERE)调控的雌激素受体。 (ERa)和雌激素受体(3 ( ER(3)的荧光素酶报告基因表达的影响〔结果大豆葺元对HEC-1B细胞体外增殖有明显 抑制作用,差异有统计学意义(P<0.01),其抑制作用有明显量效和时效性特征〔在浓度为20-80x 1 O}mol/L的大豆葺 元作用卜,报告基因1u。的表达较正常对照组明显提高,差异有统计学意义(P<0.05 ),在80x 10-`mol/L时到达最高 值;大豆葺元通过ER日介导的报告基因表达水平的升高程度强于ERa,差异有统计学意义(P<0.01)〔结论大豆葺 元可通过调节子宫内膜癌细胞ER。和ER日介导的报告基因的表达,调整ERa/ER日比例,从而抑制子宫内膜癌细 胞的增殖、     

大花蕙兰原球茎增殖、分化与离体保存的研究

以大花蕙兰原球茎为材料,从培养时间、基本培养基、糖浓度、培养方式及切割方式5个方面探讨了原球茎增殖、分化及离体保存的问题。结果表明,2个月内随着培养时间的延长,原球茎增殖与分化越显著,但培养2个月后,原球茎增殖不明显,分化却持续增加;1/2MS基本培养基利于原球茎增殖与分化,而3MS基本培养基利于原球茎保存;糖浓度的高低对原球茎增殖与分化影响显著,20 g·L~(-1)蔗糖适于原球茎保存,50 g·L~(-1)蔗糖适于原球茎增殖,而原球茎分化成苗应选用30 g·L~(-1)白糖;在3种培养方式中,固体培养利于原球茎分化,液体振荡培养利于原球茎增殖,液体静置培养利于原球茎离体保存;片状切割法利于原球茎增殖与分化,整体剥离接种法利于原球茎保存。即以2.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.1 mg·L~(-1) NAA为激素组合时,以片状切割法接种原球茎于1/2MS+50 g·L~(-1)蔗糖的培养基中并以液体振荡方式培养时利于原球茎增殖;以片状切割法接种原球茎于1/2MS+30 g·L~(-1)白糖的培养基添中并以固体方式培养时利于原球茎分化成试管苗;以整体剥离法接种原球茎于3MS+20 g·L~(-1)蔗糖培养基中并以液体静置方式培养时利于原球茎保存。上述结论为大花蕙兰试管苗快速繁殖与离体保存提供了有效的技术支持。     

中草药对奶牛常见病原菌的体外抑菌试验

采用琼脂扩散法(打孔法),选择白头翁、夏枯草、黄柏、乌梅、鱼腥草等16种中草药煎剂和复方制剂对从病牛分离出的4种主要致病菌进行了体外抑菌试验,结果发现,乌梅、黄连、白头翁、诃子、黄芩等的综合效果好,8个复方制剂除复方2和复方3对大肠杆菌无抑菌作用,其余均敏感.为中草药防治奶牛常见病的科学配方筛选提供了依据.     

饲料中添加花粉和酵母硒对中华鳖幼鳖生长和非特异性免疫功能的影响

在基础饲料中分别添加0.5×10-6酵母硒、0.1%花粉、0.5×10-6酵母硒+0.1%花粉的混合物,投喂中华鳖幼鳖90d后。测定幼鳖的生长和血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、T淋巴细胞转化率、自然杀伤细胞(NK)活性。同对照组相比,0.5×10-6酵母硒+0.1%花粉组能显著促进中华鳖的生长(P<0.05),0.5×10-6酵母硒组与0.1%花粉组的日增重率均高于对照组,但差异不显著(P>0.05)。各组间成活率无差异(P>0.05)。0.5×10-6酵母硒组NK细胞活性以及血清中SOD酶和GSH PX酶的活力分别比对照组高了156.06%、44.7%、47.5%(P<0.05)。0.1%花粉组、0.5×10-6酵母硒+0.1%花粉组血清中GSH PX酶的活力分别比对照组高了39.9%、32.9%(P<0.05),但两组的SOD酶活力与对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。0.5×10-6酵母硒组以及0.1%花粉组的T淋巴细胞转化率均比对照组高,但差异均不显著(P>0.05)。0.1%花粉组的NK细胞活性也比对照组高,但差异不显著(P>0.05)。0.5×10-6酵母硒+0.1%花粉组能显著增强中华鳖T淋巴细胞转化率及NK细胞活性(P<0.05)。